Spinning disk
Principe Spinning Disk
La source d’illumination utilisée est en général un laser. Le chemin de la lumière d’excitation passe par une partie du disque de pinhole qui va diviser l’illumination de l’échantillon en plusieurs centaines de points. Un disque de microlentilles permet préalablement de focaliser la lumière sur les pinholes est ainsi de diminuer les pertes de lumière. Lorsque le disque tourne (de 1500 tours à 5000 tours/minute suivant les versions), la position en spirale des pinhole permet d’illuminer entièrement l’échantillon douze fois par tour (figure 1). La fluorescence réémise par l’échantillon est collectée par l’objectif avant de traverser le disque de pinholes. Ceux-ci ne laissent passer que les rayons de fluorescence perpendiculaires au disque et provenant du plan focal de l’objectif. Un miroir dichroïque renvoi ensuite la fluorescence vers la caméra. L’image obtenue a une résolution axiale proche de celle obtenue avec un confocal à balayage laser conventionnel. La grande vitesse de rotation du disque ainsi que l’excitation à un niveau de lumière relativement bas permet des acquisitions très rapides et limite considérablement le photoblanchiment et la phototoxicité.
Schéma d’un spinning disk de marque Yokogawa
Equipement Spinning Disk
CSU-X1 thermostaté avec module FRAP et photoablation UV
- Statif inversé et motorisé Axio Observer.Z1 (Zeiss) pour acquisiitons 3D multipositions et mosaïques
- Autofocus hardware (Definite Focus 2 – Zeiss)
- Acquisition d’images en lumière transmise et contraste de Normarsky DIC
- Tête spinning disk CSU-X1 (Yokogawa)
5 lasers: 405nm, 445nm, 488nm, 561nm, 640nm pour observer la fluorescence - Module ILAS 2 (Gataca) FRAP à la volée avec les cinq laser et Photoablation UV 355nm pulsé 20Khz
- filtre d’émission présents (450/60; 483/25; 510/23; 535/45; 550/25, 590/35; 670/40)
- 2 Caméra sCMOS PRIME 95 (Photometrics)
- Enceinte contrôlée en température et CO2 (Life Imaging Service)
- Logiciel d’acquisition MetaMorph
- Station: HP Z840; Xeon E5-2623; 32Go RAM
Objectifs disponibles :
- Plan-Apochromat 10x/0,45 Ph1
- LD LCI Plan-Apochromat 25x/0.8 DIC Imm Korr (UV)
- Plan-Apochromat 40x/1.3 Oil DIC (420762-9800)
- C-Apochromat 40x/1.2 W Corr (421767-9970)
- Plan-APOCHROMAT 63x/1,4 Oil
- Plan-APOCHROMAT 100x/1,4 Oil
CSU-X1 à température ambiante (16-21°C)
- Statif inversé et motorisé Axio Observer.Z1 (Zeiss) pour acquisiitons 3D multipositions et mosaïques
- Acquisition d’images en lumière transmise et contraste de Normarsky DIC
- Tête spinning disk CSU-X1 double sortie (Yokogawa)
- 4 lasers: 405nm, 488nm, 561nm, 640nm
- filtres d’émission: 450/50, 360/98, 525/50, 595/50, 690/50
- 2 caméras ORCA Fusion (Hamamatsu) pour l’acquisition simultanée de deux fluorochromes
- Logiciel d’acquisition ZEN 2 avec correction d’ombrage et alignement de mosaïque
- Station: HP Z840; Xeon E5-2623 V3; 128Go RAM; NVIDIA Quadro K2200
Objectifs disponibles :
- Plan-Apochromat 10x/0,45 Ph1
- LD LCI Plan-Apochromat 25x/0.8 DIC Imm Korr (UV)
- Plan-Apochromat 40x/1.3 Oil DIC
- Plan-APOCHROMAT 63x/1,4 Oil
- Plan-APOCHROMAT 100x/1,46 Oil
CSU-W1 thermostaté grand champ d’observation :
- Microscope inversé et motorisé DMI8 (Leica) pour acquisitions 3D multipositions et mosaïques
- Autofocus hardware (Leica AFC)
- Acquisition d’images en lumière transmise et contraste de Normarsky DIC
- Tête spinning disk grand champ CSU-W1 (Yokogawa – Andor)
- 4 lasers: 405nm, 488nm, 561nm, 640nm
- filtre d’émission associés (425-475; 500-530; 500-550; 570-620; 655LP; Quad band)
- 2 caméras sCMOS Orca-Flash4 V2+ (Hamamatsu)
- Enceinte contrôlée en température et CO2 (Life Imaging Service)
- Logiciel d’acquisition MetaMorph
- Station: Dell Precision Tower 7910; Xeon E5 2630; 64Go RAM
Objectifs disponibles :
- HC PL APO 10x/0.40 (506284)
- HC PL APO 20x/0.75 IMM CORR CS2 (506343)
- HC PL APO 40x/1.30 OIL CS2 (506358)
- HC PL APO 63x/1.40 OIL CS2 (506350)
- HC PL APO 100x/1.40 OIL CS2 (506372)
- HCX PL APO 63x/1,2 W CORR (506131)
Manuels d’utilisation :
