Cytométrie en flux
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Sommaire
La plateforme de cytométrie en flux est dotée de 3 appareils :
- Un analyseur-trieur INFLUX 500 (Cytopeia racheté par BD BioSciences)
Il est équipé de 5 lasers :
. 355 nm : filtres band pass 406/50, 528/38, et 460/50, 670/30,
. 405 nm : filtres band pass 460/50, 550/50 et 610/20,
. 488 nm : filtres band pass 528/38, 579/34, 610/20 et 670/30,
. 561 nm : filtres band pass 579/34 et 624/40,
. 635 nm : filtre band pass 670/30 et long pass 750.
Le trieur Influx 500 peut analyser simultanément jusqu'à 15 paramètres (taille, granulosité et 13 signaux de fluorescence) et effectuer le tri. Au cours de l'analyse, les éléments peuvent être séparés physiquement en 1, 2, 3 et jusqu'à 4 sous-populations simultanément selon les propriétés mesurées. Un système automatique est disponible pour distribuer les cellules triées dans des plaques de culture 6 à 96 puits (clonage) en conditions stériles.
- Un analyseur CyAn ADP 9C (DakoCytomation racheté par Beckman Coulter)
L'analyseur CyAn ADP est un cytomètre haute vitesse (jusqu'à 50 000 cellules/seconde). 
Il est équipé de 3 lasers :
. 405 nm : filtres Band Pass 430/20 et 450/50,
. 488 nm : filtres Band Pass 530/40, 575/25, 613/10, 680/30 et 750 Long Pass,
. 635 nm : filtre Band Pass 665/20 et 750 Long Pass.
Il permet l'analyse simultanée des 2 paramètres taille/granulosité (FSC/SSC) et de 9 signaux de fluorescence.
- Un Imageur en flux ImageStreamX (Amnis, Proteigene)
Il est équipé de :
- un laser Brighfield permettant une mesure de la taille de la cellule, de sa structure ainsi que de sa morphologie,
- un laser Darkfield 785 nm permettant de localiser et de quantifier la lumière réfléchie par les structures sub-cellulaires (Side Scatter),
- Quatre lasers permettant de quantifier et de localiser des biomolécules d’intérêt dans chaque canal de détection :
- un laser 488nm qui permet l’acquisition des bandes spectrales allant de 480 nm à 800 nm réparties dans 5 canaux différents,
- un laser 405 nm qui permet l’acquisition des bandes spectrales allant de 430 nm à 800 nm réparties dans 5 canaux différents,
- un laser 560 nm qui permet l’acquisition des bandes spectrales allant de 560 nm à 800 nm réparties dans 4 canaux différents,
- un laser 658 nm qui permet l’acquisition des bandes spectrales allant de 660 nm à 800 nm réparties dans 2 canaux différents.
Si besoin, l’image « Darfield » peut être substituée par une image de fluorescence supplémentaire permettant l’acquisition de la bande spectrale 745-800 nm.
- des lentilles pour des grossissements 20x, 40x et 60x,
- un module d’extension de champ (EDF) permettant une projection de l’image avec un champ focal de 16 µm.
L’imageur en flux ImageStreamX permet d’imager en fluorescence des cellules (levures, micro-organismes, etc …) en suspension. Toutes les images de chaque cellule sont collectées simultanément, assurant que les données représentent une prise de vue de chaque cellule à un instant donné. Il peut générer simultanément 12 images de chaque cellule dans le flux et peut imager, à une digitalisation de 12 bits, jusqu’à :
- 600 cellules/s avec une résolution de 0,33 µm avec l’objectif 60x,
- 1000 cellules/s avec une résolution de 0,5 µm avec l’objectif 40x,
- 2000 cellules/s avec une résolution de 1 µm avec l’objectif 20x.
Le système quantifie de manière objective (statistiquement) des centaines de paramètres en utilisant le logiciel d'analyse IDEAS. Les applications sont multiples : analyse de morphologie, internalisation, signalisation cellulaire et translocation moléculaire, co-localisation, interactions cellulaires, cycle cellulaire, comptage de spots, autophagie et mort cellulaire, etc…
Dernière modification 26/03/2012